### HCC-827细胞培养指南

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：HCC-827
**细胞来源**：人非小细胞肺癌细胞
**生长特性**：贴壁生长
**冻存条件**：使用无血清冻存液（货号：C7001）
**培养体系**：1640培养基 + 10% FBS
**传代建议**：首次传代比例为1:2。传代后两天需更换培养基。
**备注**：请用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们的完整培养基。

#### 二、细胞处理方法

收到细胞后，建议将其培养至良好状态，灌满完整培养液并封好瓶口，以确保细胞的最佳运输状态。处理步骤如下：
1. 使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。
2. 将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。
3. 显微镜下观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议拍摄40x、100x和200x的照片）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片时默认状态良好。
4. 注意在培养瓶放入培养箱时，盖子应适度松动。对于传代后，建议一瓶使用原有培养基，另一瓶使用自制培养基，以便进行对比分析。

#### 三、细胞培养步骤

**A.细胞传代**：
- 当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管，并保留5ml进行培养。
- 若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体操作为：
1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞情况。若细胞大部分已脱落，轻轻敲打培养瓶并加入5ml完全培养基终止消化。
3. 吹打细胞使其完全脱落后转移至离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶，将新培养基补充至每瓶5-8ml，然后置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

**B.细胞冻存**：
1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察并在细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 将细胞悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
4. 弃去上清后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱内保存。如需转至液氮罐，建议在-80℃中存放24小时后再进行转移。

**C.细胞复苏**：
1. 从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后使用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后用5ml完全培养基重悬细胞，再接种至T25培养瓶，放入培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基以继续培养。

#### 四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会因不牢固而脱落，这是正常现象。请妥善收集所有培养液并进行离心处理。对于沉淀细胞，轻轻吹打并重悬，消化一段时间后加入培养基终止反应。需要时按1:2比例进行分瓶传代，补充新培养基至5-8ml，然后放置于37℃、5% CO2培养箱中。

#### 五、售后服务条款

1. **可重发情况及标准**：
- 发生细胞运输损坏、丢失或严重漏液等情况可重发；
- 细胞污染需在48小时内提供真实实验结果确认；
- 收到的细胞细节需提供照片作为审核依据；
- 如通过台盼蓝染色法确定细胞活性不合格，且在7天内提供实验结果可重发。

2. **不予重发情况**：
- 客户造成细胞污染或不当操作引发的细胞状态不良；
- 使用非本库推荐培养体系所引发的问题；
- 未提供收到细胞前三天照片的情况；
- 任何其他特定情况均需具体分析处理。

在此过程中，如需进一步指导，欢迎咨询尊龙凯时人生就博团队，竭诚为您提供帮助与支持！